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RNA提取365bet娱乐城平台_365bet官网_365bet网上娱乐平台盒的操作步骤

用于各种植物、动物、微生物的RNA提取,在每个365bet娱乐城平台_365bet官网_365bet网上娱乐平台盒里都有一份说明使用说明书。实验者只需要按照说明书上的步骤操作即可。使用时无需配制其它365bet娱乐城平台_365bet官网_365bet网上娱乐平台,非常方便,适合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、纯度高,可用于分子生物学后实验。但目前较好的365bet娱乐城平台_365bet官网_365bet网上娱乐平台盒价格比较贵,在实验是可以根据自己的实验需要来定夺365bet娱乐城平台_365bet官网_365bet网上娱乐平台盒的使用。

操作步骤

1. 样品处理

a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。

b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。

c. 贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。

d. 细胞悬液:离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。

e. 血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟, 10000rpm离心1分钟。弃上清,若沉淀含有红细胞,可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。

2. 将处理后的样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物完全分离。

3. 向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟。

4. 2-8℃ 12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,不要吸到沉淀。

5. 吸附柱前处理:在吸附柱中加入500ul 洗柱液,室温放置2分钟,2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min,弃废液。

6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-8 12000rpm ℃ 离心2min,弃废液。

7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min,弃废液。

8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min,弃废液。

9. 12000rpm离心2min,弃掉收集管,将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。

10. 将吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O,室温放置5min,12000rpm室温离心2min即得到RNA。


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